《慰安妇七十四分队》以抗日战争时期为背景，深刻揭示了战争对人性的摧残和对女性的残酷迫害。影片讲述了一群中国女性被日军抓去充当军妓的不幸遭遇。主人公于淑华，一个勇敢的中国女子，在结婚前夕被日军抓走，面对生死抉择，她誓死不从。未婚夫冒着生命危险前来营救，却遭到慰安妇队长村山枝子和韩国军妓顺善的阻拦，未能救出淑华。在日军肆意凌辱下，淑华坚守节操，断然拒绝成为日军军妓。日军军曹池田尚男当众撕开她的衣服，却因日军大佐大岛正雄的一句话而得以解脱。在转移的列车上，淑华在绝望中选择了自杀，但被救了下来。到达目的地后，慰安妇们经历了无尽的痛苦和折磨，受尽日军的无休止蹂躏。她们不仅要忍受身体上的摧残，还要承受心理上的巨大创伤。过了一段时间，军医前来检查慰安妇的性病，查出染有性病的人被带走处理掉。井上合子被查出，被强行带上车拉走。合子将女儿文姬的情况告诉了母亲，并嘱咐她在支那死得体面。慰安妇们在转移途中又遇到了另一队慰安妇，其中顺善发现自己的女儿文姬也在队伍里，她哭求放了女儿，却遭到一顿毒打。幸运的是，一个日军上尉救下了她们母女，但在得知自己的女儿在汉城被人推下河中淹死后，满腔怒火冲向文姬。顺善忍无可忍，举起军刀砍向上尉，结果被击毙。顺善母女在日军的机枪声中跃入江中。影片还描述了慰安妇们编入作战部队，进入战火纷飞的阵地。日军大佐伊东太郎下令组织敢死队，要求赴死前让军妓们“慰安”。伊东下令这是慰安妇最后一次“工作”，完成后全部消灭。淑华带领慰安妇们奋起反抗，她们杀死弹药库守卫人员，试图炸毁弹药库，但未能成功。执法队赶来押解慰安妇时，敢死队提前上前线。池田奉命来消灭慰安妇，被炮弹炸伤，手持手榴弹冲进。慰安妇们醒悟过来，踩过负伤的池田，冲出隐蔽所。淑华她们冲向弹药库，把弹药库炸毁。然后跑向中国阵地，枪声在她们的身后响起，她们纷纷中弹倒下。在炮火的硝烟中，于淑华也终于栽倒了。